| Doctorant : | Simon HUET |
| Directeur de thèse : | Yves-Henri SANEJOUAND , Directeur de recherche CNRS |
| Financement : | AFFILOGIC |
| Date de la soutenance : | vendredi 30 octobre 2015, 00h00 |
| Modalité : | |
| Jury : |
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La reconnaissance moléculaire, ou formation spécifique de complexes entre molécules par l’intermédiaire d’interactions physico-chimiques, est un mécanisme d’action fondamental des protéines appliquées à un usage médical. Dans cette étude, nous explorons l’ingénierie rationnelle de cette fonction avec comme partenaire une nouvelle classe de protéines destinée à développer les médicaments de demain: les Nanofitines (NF). Dans l’objectif de guider les approches expérimentales (in vitro) par celles prédictives (in silico) dans une collaboration réciproque, ce manuscrit décrit successivement deux preuves de concept appliquées à des NF dirigées contre la protéine de fluorescence verte (GFP). La première approche, conçue pour l’humanisation de NF par transfert sur des protéines humaines, a consisté à isoler 11 résidus fonctionnels à greffer à partir de NF anti-GFP générées par ribosome display. Le squelette du feuillet beta exposant ces acides aminés clés a ensuite été recherché dans une banque structurale pour identifier trois protéines humaines hôtes arborant un feuillet similaire (RMS ≤ 0,63Å). Une fois greffées des résidus clés des NF, ces protéines ont démontré une insolubilité ou une absence de fixation détectable à la GFP, contrairement à un homologue structural des NF. La seconde approche a visé à réaliser le design de novo de NF anti-GFP par modélisation moléculaire. Cette démarche, proposée comme alternative rationnelle complémentaire du procédé de sélection in vitro, a abouti à la découverte d’une NF dont l’épitope ciblé s’avère compatible avec les prédictions réalisées. Cette stratégie nécessitera d’être complétée afin d’optimiser l’affinité des NF générées de novo.
Mots-clés : design rationnel de novo, évolution dirigée, greffe de charpente, humanisation protéique, ingénierie des protéines, interactions protéine-protéine, modélisation moléculaire, nanofitines
Publications
2023
Dans: Cybium, vol. 47, iss. 3, p. 315-323, 2023, ISBN: 0399-0974.